兰州百合原生质体的分离纯化和应用OA北大核心CSTPCD

该研究旨在建立兰州百合(Lilium davidii var.unicolor)原生质体分离纯化体系,以促进其基因功能研究和体细胞杂交育种。通过研究材料选择、渗透压调节剂浓度、酶添加量、酶解时间和纯化条件等关键因素,确定了酶解法提取兰州百合原生质体的最优参数。结果表明:继代30 d左右的兰州百合无菌苗叶片,在0.4 mol·L^(-1)的甘露醇环境下,使用含15 g·L^(-1)的纤维素酶和5 g·L^(-1)的离析酶的酶解液酶解3 h,即能分离完整均一的兰州百合叶肉原生质体,平均产量超过4×10^(6)个·g-1,且细胞活力超过90%。在0.4 g·mL^(-1)PEG-4000介导下转染35S::GFP质粒15 min,成功获得阳性转化子。同时,在0.5 g·mL^(-1)PEG-4000与5 mmol·L^(-1)CaCl_(2)(pH=10)作用下,原生质体发生融合,形成双核细胞。该体系的建立为兰州百合体细胞杂交育种提供了高质量的细胞材料,也为其基因功能研究搭建了平台。