广西地区牛肠道病毒E、F型的分离鉴定OA北大核心CSTPCD

【目的】通过分离牛肠道病毒(BEV),了解广西地区BEV的传播途径和病原学特性,为疫情监测和疫苗研发提供数据支持,促进广西地区对该病毒的防控。【方法】本研究将BEV检测的阳性病料接种于胎牛肾细胞(MDBK),经连续传代后,通过致细胞病变效应(CPE)、RT-PCR、间接免疫荧光试验(IFA)等鉴定分离毒株。对鉴定成功的毒株进行空斑纯化试验后测定毒价,并进行多步生长曲线试验。设计特异性引物扩增病毒全基因组序列,利用MegAlign软件分析分离毒株与参考毒株的核苷酸和氨基酸序列相似性,绘制病毒全基因组序列及VP 1基因序列遗传进化树。【结果】细胞接种病料后第3代出现明显CPE,RT-PCR结果显示,扩增出大小为239 bp的目标条带。IFA结果显示,接种分离株的MDBK细胞内可观察到特异性绿色荧光。本研究分离出了2株BEV,命名为GXHC2317和GXWZ2317株。半数组织培养感染剂量(TCID 50)测定结果显示,毒株GXHC2317和GXWZ2317 TCID 50分别为107.47和105.75/0.1 mL。多步生长曲线试验结果显示,毒株GXHC2317和GXWZ2317在MDBK细胞中复制增殖良好,24 h后病毒复制能力达到峰值。相似性分析结果表明,GXHC2317株与参考毒株核苷酸和氨基酸序列相似性分别为69.5%~80.1%和81.1%~96.5%,与宁夏地区分离株NX-FY40氨基酸序列相似性最高。GXWZ2317株与参考毒株核苷酸和氨基酸序列相似性分别为69.3%~87.3%和80.3%~96.4%,与山东地区分离株SD-S67氨基酸序列相似性最高。病毒全基因组序列与VP 1基因序列遗传进化树结果表明,GXHC2317株属于BEV E3亚型,GXWZ2317株属于BEV F1亚型。【结论】本研究从广西地区分离到BEV E3亚型和F1亚型,丰富了BEV在国内流行趋向调查及病原学研究,为广西地区BEV相关基础与应用研究奠定了病原学基础。