基于Nrf2/NQO1/GCL信号通路探讨益肾健脑方对血管性痴呆大鼠神经元凋亡的影响OACSTPCD

目的研究益肾健脑方对血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠神经元凋亡的影响及作用机制。方法将60只SPF级大鼠随机分为模型制备组50只和空白组10只,模型制备组分时段结扎双侧颈总动脉,空白组仅分离双侧颈总动脉但不结扎。术后4周通过Morris水迷宫筛选出模型制备成功大鼠28只,随机分为模型组、多奈哌齐组(0.45 mg·kg^(-1)·d^(-1))、益肾健脑方高剂量组(24.3 g·kg^(-1)·d^(-1))、益肾健脑方低剂量组(12.15 g·kg^(-1)·d^(-1))各7只,加上空白组10只,共5组。给药4周后,行Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力,HE染色观察大脑皮质和海马CA1区组织病理变化,TUNEL染色观察大脑皮质和海马CA1区神经细胞凋亡情况,免疫组织化学法检测大脑皮质和海马CA1区天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(cysteinyl aspartate-specific proteinase-3,Caspase-3)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-7(cysteinyl aspartate-specific proteinase-7,Caspase-7)蛋白表达水平,Western blot检测海马组织核因子E2相关因子2(nuclear factor-E2-related factor 2,Nrf2)、醌氧化还原酶1(quinone oxidoreductase 1,NQO1)、谷氨酰半胱氨酸连接酶(glutamate-cysteine ligase,GCL)蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组定位航行实验第5天逃避潜伏期明显增加,空间探索实验穿越平台次数明显减少,目标象限停留时间明显缩短(P<0.01);模型组脑组织病理损伤明显,神经细胞凋亡率显著升高(P<0.01);模型组大脑皮质区和海马CA1区Caspase-3、Caspase-7阳性表达显著升高(P<0.01);模型组海马组织Nrf2、NQO1、GCL蛋白表达显著降低(P<0.01)。与模型组比较,多奈哌齐组和益肾健脑方高、低剂量组定位航行实验中第5天逃避潜伏期明显缩短,空间探索实验中穿越平台次数增加,目标象限停留时间明显延长(P<0.05,P<0.01);多奈哌齐组和益肾健脑方高、低剂量组脑组织病理损伤减少,神经细胞凋亡率均显著降低(P<0.01);多奈哌齐组和益肾健脑方高、低剂量组Caspase-3、Caspase-7阳性表达均显著降低(P<0.01);多奈哌齐组和益肾健脑方高、低剂量组海马组织Nrf2、NQO1、GCL蛋白表达均显著升高(P<0.01)。结论益肾健脑方可以改善VD大鼠学习记忆能力、抑制Caspase-3和Caspase-7蛋白表达及减少神经元凋亡,其机制可能与激活Nrf2/NQO1/GCL信号通路有关。