LincRNA 00312调节SOSTDC1介导的BMP-Smads轴对卵巢癌细胞恶性生物学行为的影响OACSTPCD

目的:探讨长链非编码RNA(LncRNA)00312调控靶向含硬化蛋白域蛋白1(SOSTDC1)介导BMP-smads轴对卵巢癌(OC)细胞恶性生物学行为的影响。方法:收集2021年9月至2022年12月收治于运城市中心医院的15例接受卵巢癌根治术患者的癌组织及癌旁组织,另选取人正常卵巢上皮细胞IOSE80和OC细胞(SKOV3和OVCAR)作为靶细胞;qRT-PCR法分析OC癌和癌旁组织以及SKOV3和OVCAR中LincRNA 00312表达;将SKOV3细胞分为si-NC组、si-LincRNA 00312组、si-LincRNA 00312+si-SOSTDC1组、OE-NC组和OE-SOSTDC1组。KEGG分析LincRNA 00312下游可能通路;Western blot检测OC组织和各组SKOV3细胞中SOSTDC1和BMP-smads通路相关蛋白表达;集落形成实验、划痕实验和Transwell实验检测各组SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭;生物信息学预测、双荧光素酶报告基因和RNA-蛋白pull-down实验检测LincRNA 00312和SOSTDC1的靶向作用。结果:OC癌组织中LincRNA 00312表达高于癌旁组织(t=7.288,P<0.05);与IOSE80细胞比较,SKOV3和OVCAR3细胞中LincRNA 00312表达增多(t=27.805、8.860,均P<0.05)。KEGG通路分析显示,LincRNA 00312主要与BMP-smads信号通路、肿瘤中转录失调和MAPK信号通路等显著相关;生物信息学分析发现,LincRNA 00312与SOSTDC1的mRNA序列之间存在可能的结合位点。与癌旁组织相比,癌组织中SOSTDC1的mRNA和蛋白表达降低(t=23.653、27.498,均P<0.05),BMP2、BMP4、BMP7、SAMD1/5/9和p-SAMD1/5/9蛋白表达水平升高(t=5.952、7.322、8.024、7.094和5.512,均P<0.05)。与si-NC组相比,si-LincRNA 00312组SKOV3细胞的集落形成数、划痕愈合面积占比和侵袭细胞数均降低(t=6.914、4.729、11.321,均P<0.05)。双荧光素酶报告基因发现,OE-SOSTDC1组SKOV3细胞pGL3-SOSTDC1-WT荧光素酶活性低于OE-NC组(t=19.744,P<0.05);RNA-蛋白pull-down实验发现,转染Bio-LincRNA 00312-WT细胞中SOSTDC1富集倍数高于转染Bio-LincRNA 00312-MUT细胞(t=36.374,P<0.05)。与OE-NC组相比,OE-SOSTDC1组SKOV3细胞的SOSTDC1蛋白表达升高(t=39.491,P<0.05),BMP2、BMP4、BMP7、SAMD1/5/9和p-SAMD1/5/9蛋白表达降低(t=19.696、19.752、14.203、45.928和21.637,均P<0.05)。与si-LincRNA 00312组相比,si-LincRNA 00312+si-SOSTDC1组SKOV3细胞的集落形成数、迁移率和侵袭细胞数以及BMP2、BMP4、BMP7、smad1/5/9和p-smad1/5/9蛋白表达均增加(t=8.911、8.193、8.873、14.203、12.222、20.821、19.365和31.225,均P<0.05)。结论:LincRNA 00312在OC组织中表达上调,可能通过调节SOSTDC1介导的BMP-smads信号通路,促进癌细胞增殖、迁移和侵袭。