通过CRISPR/Cas9技术构建Apoe基因敲除小鼠模型及其表型研究OA北大核心CSTPCD

目的本研究通过CRISPR/Cas9技术构建Apoe基因敲除小鼠模型,以进一步探讨Apoe在血脂代谢和形成动脉粥样硬化病症中的功能。方法针对C57BL/6J小鼠Apoe基因设计2个sgRNA靶位点,并将sgRNA和Cas9 mRNA共同注入受精卵,移植至ICR受体鼠,获得F0代小鼠,通过提取鼠尾DNA以及PCR筛选,获得阳性小鼠。通过荧光定量逆转录PCR法检测小鼠各组织中Apoe mRNA表达水平。检测小鼠血清中的血脂指标,并通过油红O染色主动脉血管,以检测动脉内膜脂质的积聚。结果PCR及测序结果确认成功构建了Apoe基因敲除小鼠(C57BL/6-Apoe^(em1)/Nifdc,简称Apoe KO小鼠);实时荧光定量逆转录PCR实验结果显示,Apoe KO纯合小鼠(Apoe^(-/-))的肝、大脑、脾、肾和肺组织中的Apoe mRNA显著降低;血清总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇水平显著升高,且雄性小鼠的血清高密度脂蛋白胆固醇水平显著降低;主动脉血管油红O染色显示,在相同且食用正常饲料条件下,野生型(wild-tpye,WT)小鼠无脂质堆积,Apoe^(-/-)小鼠则呈现大量红色脂质斑块。结论本研究成功构建Apoe基因敲除小鼠,该纯合子小鼠在非高脂饲料下呈典型的异常血脂代谢及主动脉内膜脂质积聚特征,为Apoe KO小鼠资源提供了背景数据,为血脂代谢异常表型研究提供新模型。