问号钩端螺旋体感染诱导人巨噬细胞发生自噬及自噬作用研究OA北大核心CSTPCD

目的了解问号钩端螺旋体(简称钩体)对人巨噬细胞自噬的影响,并研究自噬在巨噬细胞杀灭钩体过程中的作用。方法人THP-1单核细胞用佛波酯(PMA)预处理使其分化为巨噬细胞。采用透射电镜法检测细胞内钩体及自噬小体形态。采用激光共聚焦显微镜法结合LC3-II-GFP质粒脂质体转染技术检测胞内自噬小体形成情况及与钩体共定位水平。采用Western blotting技术检测自噬相关蛋白LC3和P62表达水平。采用激光共聚焦显微镜技术检测自噬小体与溶酶体共定位情况及胞内问号钩体活力。结果钩体感染巨噬细胞后,胞内出现包裹有钩体的自噬小体,胞内LC3-II-GFP聚集点的数量增加,LC3-II-GFP与钩体共定位水平增加,且自噬小体与溶酶体共定位率增加。Western blotting检测结果显示,钩体感染巨噬细胞后,胞内LC3-II蛋白表达量增加,P62蛋白表达水平降低。自噬激活后细胞内问号钩体死亡数量增加,反之亦然。结论问号钩体感染可诱导人巨噬细胞产生自噬,且自噬有助于人巨噬细胞杀灭问号钩体。