METTL16靶点调控小分子化合物根皮素和EGCG对HIV-1复制的抑制作用OACSTPCD

目的探讨甲基转移酶样蛋白16(METTL16)靶点调控小分子化合物根皮素和表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对HIV⁃1复制的影响。方法(1)采用高通量计算机生物信息筛选技术筛选出与METTL16靶点相关的两种小分子化合物,即根皮素和EGCG。(2)利用非小细胞肺癌细胞A549对化合物进行初筛实验。将A549细胞分为空白组(仅含培养基)、对照组(含培养基和A549细胞)、实验组(含培养基、A549细胞、20μmol/L根皮素/EGCG),干预24 h后采用CCK⁃8法测定各组A549细胞的相对活性。(3)将MT⁃2细胞和TZM⁃bl细胞分为空白组(含培养基)、对照组(含培养基、细胞)、实验组(含培养基、细胞、5种浓度根皮素/EGCG)。干预24 h后,通过ATP荧光定量分析法来检测活细胞数量。(4)将MT⁃2细胞和TZM⁃bl细胞分为阴性对照组(未感染病毒且未干预)、阳性对照组、实验组。在阳性对照组、实验组中,通过感染HIV⁃189.6构建HIV⁃189.6/TZM⁃bl模型、HIV⁃189.6/MT⁃2模型。染毒后,在实验组TZM⁃bl细胞中立即加入5种浓度根皮素或EGCG,在实验组MT⁃2细胞中立即加入5种浓度根皮素。通过检测荧光素酶报告基因的表达来评估各组细胞中相对病毒水平。结果(1)实验组A549细胞的相对活性低于对照组(P<0.05),即根皮素和EGCG对A549细胞有不同程度的杀伤抑制效果。(2)在5种浓度的根皮素干预下,实验组MT⁃2细胞的相对活性均>80%;在1.25μmol/L、2.5μmol/L的根皮素干预下,实验组TZM⁃bl细胞的相对活性均>80%;在5种浓度的EGCG干预下,实验组TZM⁃bl细胞的相对活性>80%。(3)与阳性对照组比较,在10μmol/L、20μmol/L根皮素干预下的实验组MT⁃2细胞上清液中相对病毒水平降低,在5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L根皮素干预下的实验组TZM⁃bl细胞中的相对病毒水平降低,在5种浓度EGCG干预下的实验组TZM⁃bl细胞中的相对病毒水平均降低(P<0.05)。(4)根皮素在HIV⁃189.6/MT⁃2模型、HIV⁃189.6/TZM⁃bl模型中的治疗指数分别为>2.064、2.078;EGCG在HIV⁃189.6/TZM⁃bl模型中的治疗指数>3.587。结论根皮素和EGCG可能通过调节甲基化转移酶中的METTL16靶点来调控N6⁃甲基腺苷修饰,从而抑制宿主细胞中HIV⁃1的感染和复制。