LM-Exos对巨噬细胞和CD8^(+)T淋巴细胞的调节作用OA北大核心CSTPCD

【目的】分离感染单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)RAW264.7巨噬细胞分泌的外泌体(Exosomes,Exos),探究其对RAW264.7巨噬细胞和CD8^(+)T淋巴细胞的调节作用及机制,为揭示LM感染、胞内生存及免疫逃逸机制提供理论参考。【方法】通过差异超速离心法结合分子排阻法提取感染LM后RAW264.7巨噬细胞外泌体(LM-Exos),利用透射电子显微镜、粒径分析仪和Western blotting鉴定LM-Exo表型。通过实时荧光定量PCR、细胞活力检测和ELISA等方法分析不同剂量LM-Exos对RAW264.7巨噬细胞和CD8^(+)T淋巴细胞的调节作用。【结果】LM-Exos具有双层膜结构类圆形的小囊泡,直径约为60~80 nm。Western blotting检测结果显示,LM-Exos表面含有CD9、CD63、TSG101特异性标记蛋白。LM-Exos对RAW264.7巨噬细胞形态和功能的影响具有明显的浓度依赖性,随着LM-Exos刺激时间延长,细胞形态由圆形逐渐分化为长梭形,并伸出不同形态的伪足。实时荧光定量PCR结果显示,随着LM-Exos刺激浓度的增加,IL-1β、IL-10、IL-6和TNF-α基因相对表达量均呈升高趋势。高浓度LM-Exos刺激后,RAW264.7巨噬细胞活力略有下降但抗LM EGD-e能力增强。与低浓度LM-Exos刺激相比,高浓度LM-Exos刺激显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)提高了CD8^(+)T淋巴细胞TNF-α和IL-10相对分泌水平,并诱导了CD8^(+)T细胞形态变化及凋亡水平升高。【结论】不同剂量的LM-Exos对RAW264.7巨噬细胞和CD8^(+)T淋巴细胞表现出不同的调控作用。LM-Exos能增强RAW264.7巨噬细胞抗LM EGD-e能力,同时也能诱导CD8^(+)T淋巴细胞分化和凋亡。LM-Exos可以作为免疫激活剂,增强RAW264.7巨噬细胞的免疫功能,高剂量的LM-Exos可能会通过诱导T细胞凋亡来减弱机体的免疫应答,进而实现LM免疫逃逸,这种双重作用可能是LM在感染过程中实现免疫逃逸的重要机制。