RSPO2对卵巢颗粒细胞氧化应激和凋亡的影响OA北大核心CSTPCD

目的以人卵巢颗粒肿瘤细胞为模型,探究特异性顶部盘状底板反应蛋白2(RSPO2)对卵巢颗粒细胞氧化应激和凋亡的影响。方法在COV434细胞中瞬时转染RSPO2过表达质粒和小干扰RNA(siRNA),实时荧光定量PCR(qPCR)、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测过表达和干扰效率,利用活性氧检测试剂盒测定细胞内活性氧含量,流式细胞术检测凋亡水平,qPCR、Western blot测定氧化应激和凋亡相关基因表达量,免疫共沉淀检测互作蛋白。结果成功实现RSPO2的过表达和干扰。过表达RSPO2显著抑制颗粒细胞内活性氧的水平(P<0.05),极显著抑制颗粒细胞早期凋亡(P<0.01),干扰RSPO2可得到相反的试验结果。过表达RSPO2能显著上调SOD1、SOD2、CAT mRNA和蛋白表达水平(P<0.05),显著下调Caspase 3、Caspase 8表达水平(P<0.05)。相反,干扰RSPO2显著下调SOD1、CAT表达水平(P<0.05),显著上调Caspase 3、Caspase 8表达水平(P<0.05),并发现RSPO2和SOD1、CAT、Caspase 3存在明显的蛋白互作现象。结论干扰RSPO2促进细胞内活性氧的积累,下调SOD1和CAT的表达,从而促进氧化应激;干扰RSPO2上调Caspase 3和Caspase 8的表达,促进细胞的凋亡,提示RSPO2在卵巢颗粒细胞中发挥着重要的作用。