LncRNA NEAT1通过miR-195-5p/CEBPA轴促进骨髓瘤细胞增殖和转移机制的实验研究OA

目的 探究长链非编码RNA(LncRNA)核富集丰富的转录本1(NEAT1)通过miR-195-5p/CCAAT增强子结合蛋白α(CEBPA)轴对骨髓瘤细胞增殖和转移的影响及机制。方法 (1)收集2021年3月~2023年2月在山东省第一医科大学附属聊城市第二人民医院血液内科住院的40例多发性骨髓瘤(MM)患者和10例健康骨髓供者的骨髓单个核细胞(BMNC)及MM细胞系U266,RPMI 8226,NCI-H 929和MM.1S,RT-qPCR和Western blot检测细胞中NEAT1,miR-195-5p,CEBPA mRNA和蛋白水平。(2) U266细胞分为过表达NEAT1组(NEAT1组)及其对照组(NC组)、敲低NEAT1表达组(sh-NEAT1组)及其对照组(sh-NC组)、过表达NEAT1和miR-195-5p组(NEAT1+miR-195-5p组)及其对照组(NEAT1+miR-NC组)、过表达miR-195-5p和CEBPA组(miR-195-5p+CEBPA组)及其对照组(miR-195-5p+NC组)。CCK-8和5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EdU)染色检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;RT-qPCR检测细胞中NEAT1,miR-195-5p,CEBPA mRNA水平;Western blot检测细胞中CEBPA,Ki67,增殖细胞核抗原(PCNA),基质金属蛋白酶(MMP)-2,MMP-9,磷脂酰肌醇3激酶(PI3K),p-PI3K,蛋白激酶B(AKT),p-AKT,雷帕霉素靶蛋白(mTOR),p-mTOR蛋白水平。(3) 20只裸鼠分为敲低NEAT1表达组(sh-NEAT1组)及其对照组(sh-NC组),每组各10只。裸鼠皮下注射相应已转染的U266细胞悬液,四周后测定移植瘤各项指标差异。结果 (1)与正常BMNC相比,MM患者和MM细胞系中NEAT1,CEBPA mRNA和蛋白水平升高,miR-195-5p水平降低,差异具有统计学意义(t=11.697,9.272,4.352,11.639,均P<0.05)。(2)过表达NEAT1后,与NC组比较,NEAT1组细胞NEAT1,CEBPA mRNA和蛋白水平升高,miR-195-5p水平降低(t=12.825,5.874,13.893,4.797);细胞培养72h A值、EdU阳性率升高,细胞迁移、侵袭数增多(t=9.425,5.632,8.841,5.364);Ki67,PCNA,MMP-2,MMP-9,p-PI3K/PI3K,p-AKT/AKT,p-mTOR/mTOR蛋白水平升高(t=14.227,7.743,7.348,7.803,8.714,8.629,7.359),差异具有统计学意义(均P<0.05);敲低NEAT1表达后,与sh-NC组比较,sh-NEAT1组细胞NEAT1,CEBPA mRNA和蛋白水平降低(t=5.776,5.001,4.503),miR-195-5p水平升高(t=4.456),细胞迁移、侵袭能力降低(t=6.204,8.792),差异具有统计学意义(均P<0.05);过表达miR-195-5p能够部分逆转过表达NEAT1对细胞上述指标的影响,差异具有统计学意义(t=4.356~10.809,均P<0.05);过表达CEBPA能够部分逆转过表达miR-195-5p对细胞上述指标的影响,差异具有统计学意义(t=4.329~14.452,均P<0.05)。(3)敲低NEAT1表达能够抑制裸鼠移植瘤生长,差异具有统计学意义(t=5.175~18.190,均P<0.05)。结论 LncRNA NEAT1通过靶向miR-195-5p/CEBPA表达促进MM细胞增殖和转移,其可能通过激活PI3K/AKT/mTOR通路发挥作用。