鸡热休克蛋白8基因克隆、生物信息学分析及其在胸腺中表达模式研究OA北大核心

[目的]探讨鸡热休克蛋白8(heat shock protein family A member 8,HSPA8)的生物学特性及其在应激状态下胸腺中的表达模式。[方法]试验以固始鸡胸腺为材料,利用PCR技术扩增并克隆HSPA8基因CDS区,通过生物信息学方法分析其生物学特性和结构特点,并检测其在不同组织中的相对表达量。构建断喙应激和热应激模型,采用实时荧光定量PCR技术检测炎症因子和HSPA8基因在不同应激模型鸡胸腺中的表达情况。[结果]鸡HSPA8基因CDS区长度为1 941 bp,共编码氨基酸646个,与红原鸡基因序列相似性为98.92%;HSPA8基因核苷酸序列的系统发育树结果表明,固始鸡与火鸡亲缘关系最近,与哺乳动物次之,与低等鱼类亲缘关系最远;HSPA8蛋白属于酸性蛋白,稳定性和亲水性强,不属于分泌蛋白且无跨膜结构域,有多个磷酸化和糖基化修饰位点,主要在细胞核内发挥作用,具有2个保守性结构域,与DNAJC5、HSPB1、DNAJA1和GAK等蛋白存在相互作用;HSAP8基因在雏鸡各组织中广泛表达,其中在胰腺中表达量最高,在胸肌中表达量最低;应激模型评价结果发现,断喙应激和热应激导致鸡血清皮质酮、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等含量显著增加(P<0.05),T细胞亚群(CD3^(+))和免疫球蛋白G(IgG)含量有所降低;断喙应激模型鸡胸腺中IL-1β、IL-6、TNF-α和IL-8基因表达量在第1天显著升高(P<0.05),第5天显著降低(P<0.05);热应激模型鸡胸腺中IL-1β、IL-6、TNF-α和IL-8基因表达量显著升高(P<0.05);HSPA8基因在断喙后第1和3天胸腺中表达量显著升高(P<0.05),第5天显著降低(P<0.05);在持续热应激组中显著降低(P<0.05)。[结论]HSPA8基因参与鸡胸腺应激性免疫应答反应,可作为反映家禽是否处于应激性免疫抑制状态的可靠指标。以上结果为进一步研究HSPA8的免疫调控功能提供参考依据。