lncRNA NEAT1调控骨关节炎软骨细胞焦亡的机制OA

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)核富集丰富转录本1(NEAT1)对骨关节炎(OA)软骨细胞焦亡信号轴的影响和潜在机制。方法收集6例OA患者的膝关节软骨组织和6例正常软骨组织。使用TargetScan 7.2和StarBase预测miR-26a与lncRNA NEAT1的靶向关系,双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA NEAT1与miR-26a的靶向调控作用。将培养的软骨细胞系分为对照组(不进行药物干预)、IL-1β组(添加10μg/L IL-1β诱导体外OA)、IL-1β+NEAT1-EV组(添加10μg/L IL-1β,联合转染20μg/L的NEAT1-EV)、IL-1β+NEAT1-OE组(添加10μg/L IL-1β,联合转染20μg/L的NEAT1-OE)、IL-1β+NEAT1-OE+mimic-NC组(添加10μg/L IL-1β,联合转染20μg/L的NEAT1-OE和50μg/L的mimic-NC)、IL-1β+NEAT1-OE+mimic组(添加10μg/L IL-1β,联合转染20μg/L的NEAT1-OE和50μg/L的miR-26a mimic)。qRT-PCR法检测OA软骨组织和细胞中lncRNA NEAT1和miR-26a的表达水平。CCK-8法检测各组细胞的活力,蛋白免疫印迹法检测各组Caspase1和cleaved-Caspase1蛋白表达及细胞焦亡标志物[NOD样受体蛋白3(NLRP3)、白细胞介素18(IL-18)和切割模式的Gasdermin D(cleaved-Gasdermin D)]的表达。结果OA软骨组织中lncRNA NEAT1的表达水平高于正常软骨组织(P<0.05),而miR-26a的表达水平低于正常软骨组织(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实,lncRNA NEAT1与miR-26a具有靶向调控作用。与对照组比较,IL-1β组细胞中lncRNA NEAT1、cleaved-Caspase1、NLRP3、IL-18、cleaved-Gasdermin D的表达水平均上调(P<0.05),而miR-26a表达水平下调(P<0.05),细胞活力降低(P<0.05)。与IL-1β+NEAT1-EV组比较,IL-1β+NEAT1-OE组细胞中lncRNA NEAT1、cleaved-Caspase1、NLRP3、IL-18、cleaved-Gasdermin D的表达水平均上调(P<0.05),而miR-26a表达水平下调(P<0.05),细胞活力下降(P<0.05)。与IL-1β+NEAT1-OE+mimic-NC组比较,IL-1β+NEAT1-OE+mimic组细胞中cleaved-Caspase1、NLRP3、IL-18、cleaved-Gasdermin D的表达水平均下调(P<0.05),而miR-26a表达水平上调(P<0.05),细胞活力升高(P<0.05)。结论lncRNA NEAT1通过靶向抑制miR-26a激活OA软骨细胞中Caspase1介导的焦亡信号轴。