一株具有多位点核苷酸替换的新型猪圆环病毒2d亚型毒株的分离与鉴定OA北大核心

猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)是引起猪圆环病毒相关性疾病(porcine circovirus associated diseases,PCVAD)的主要病原。患病猪表现为发育不良、呼吸困难、生殖障碍等症状。目前,PCV多种亚型在中国流行,给养猪业造成了巨大经济损失。为了鉴定一株疑似新型PCV2感染死亡的猪病料,本研究采集疑似PCV感染的病料组织并对病毒进行分离培养,通过PCR,免疫荧光染色和序列测定分析对病毒进行鉴定。并对阳性样品进行全基因组扩增,测序后与GenBank上其他不同国家和地区来源的28株PCV的同源性、系统发育树和重组特性进行分析。使用6周龄BALB/c小鼠模型,感染毒株后观察不同组织病理切片。使用第5代病毒液滴鼻和颈部肌肉注射两种方式感染14周龄健康猪,观察和分析试验猪的体温、增重、病毒血症、各组织病毒载量等评价该毒株的致病性。结果显示,本试验分离到一株PCV2d亚型毒株,命名为SD02,该毒株全基因组大小为1767 bp(GenBank登录号为OQ730503),其中ORF2大小为705 bp,共编码234个氨基酸。SD02相较于其他已报道的PCV2d毒株,在ORF2编码的Cap蛋白羧基末端增加了1个赖氨酸。SD02株与参考毒株基因全序列的核苷酸同源性为94.2%~99.1%,与22625-33毒株(PCV2d)相似性最高,为99.1%。该毒株感染的小鼠出现明显间质性肺炎和坏死性肝炎等症状。该毒株感染后会引起猪消瘦和生长缓慢等现象,病毒血症存在时间超过21 d,并且具有广泛的组织嗜性,其中各淋巴结病毒载量更高,会引起机体的免疫抑制。本研究为PCV流行病学研究和疫苗开发提供了新的参考。