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慢病毒介导绿色荧光蛋白转染人胚胎干细胞及其培养北大核心CSCDCSTPCD
作者：李宁朱宝长朱宛宛王淑艳任萍关云谦张愚
发表期刊：基础医学与临床 2008年10期
关键词：人胚胎干细胞绿色荧光蛋白慢病毒
摘要：目的稳定培养人胚胎干细胞,并通过慢病毒载体对其进行绿色荧光蛋白标记.方法利用小鼠胚胎成纤维细胞作为饲养层或Matrigel作为基质培养人胚胎干细胞,包装带有GFP序列的慢病毒转染人胚胎干细胞.对转染前后的人胚胎干细胞进行了碱性磷酸酶和SSEA-3免疫组化鉴定.结果在MEF饲养层和Matrigel上均可培养出呈克隆样生长,表达标志抗原的人胚胎干细胞,经慢病毒转染及抗生素筛选后仍可稳定表达GFP.结论成功地培养了人胚胎干细胞系,并进行了GFP标记.
利用巢式聚合酶链反应检测单个胚胎小体细胞中时钟基因的表达北大核心CSCDCSTPCD
作者：关云谦蔡彦宁谢淑朱宛宛徐艳玲张愚陈彪
发表期刊：基础医学与临床 2006年12期
关键词：胚胎小体巢式聚合酶链反应时钟基因单细胞
摘要：目的建立一组灵敏的检测时钟基因(clock gene)的巢式聚合酶链反应(nested PCR)方法,并检测小鼠胚胎小体(EB)来源的单细胞中重要时钟基因的表达情况.方法培养小鼠胚胎干细胞(mESC),体外诱导分化为EB,提取总RNA并进行反转录,用BMAL1、CLOCK、CRY1和CRY2基因特异引物进行巢式聚合酶链反应,电泳检测扩增产物,从而建立相应的巢式PCR反应体系.利用膜片钳获取胚胎小体来源的单个细胞,通过巢式PCR反应…查看全部>>
不同滋养层对维持人胚胎干细胞的生长作用北大核心CSCDCSTPCD
作者：朱宛宛李宁王芳付琳琳徐艳玲关云谦张愚
发表期刊：中国医学科学院学报 2009年4期
关键词：人胚胎干细胞滋养层包皮成纤维细胞骨髓间充质干细胞
摘要：目的比较不同滋养层对保持连续传代培养的人胚胎干细胞(hESC)不分化和高增殖能力作用的差异.方法分别用小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)、人包皮成纤维细胞(hFF)、人骨髓间充质细胞(hMSC)作为滋养层培养hESC系H9细胞,采用碱性磷酸酶染色和台盼蓝染色观察不同滋养层支持的hESC的碱性磷酸酶阳性克隆数、细胞产量和细胞存活率,并采用免疫荧光染色对传代5代以后的hESC进行生物学鉴定.结果 3种滋养层细胞均可维持hESC呈克隆样生长,…查看全部>>
食蟹猴胚胎干细胞的培养及向神经细胞诱导分化北大核心CSCDCSTPCD
作者：朱宛宛吴迪李宁邹春林徐艳玲关云谦张愚
发表期刊：基础医学与临床 2009年7期
关键词：食蟹猴胚胎干细胞细胞培养神经分化
摘要：目的建立食蟹猴胚胎干细胞系体外培养体系,并诱导其向神经细胞分化,为在体移植实验奠定基础.方法用小鼠胚胎成纤维细胞作为饲养层,长期培养食蟹猴胚胎干细胞.在无血清培养基中添加小鼠重组Noggin的方式诱导其向神经细胞分化,并对分化各阶段细胞进行免疫组化染色检测分化效果.结果食蟹猴胚胎干细胞在饲养层上成克隆样生长,可以长期扩增超过20代并保持胚胎干细胞的特性.诱导向神经细胞分化约14 d,即可形成呈玫瑰花环样的神经前体细胞结构,可见大…查看全部>>
小分子化合物组合改善多能干细胞向脑类器官定向分化的效率CSTPCD
作者：朱宛宛周金娟修建波
发表期刊：基础医学与临床 2024年6期
关键词：多能干细胞小分子化合物神经分化脑类器官
摘要：目的优化多能干细胞(PSCs)定向分化为脑类器官的条件,提高人脑类器官的分化效率.方法利用人胚胎干细胞(hESCs)系H9向人脑类器官诱导分化体系,在早期脑类器官分化到神经祖细胞的发育阶段添加小分子化合物组合,通过形态学观察不同分化阶段脑类器官中的神经祖细胞形成的效率、细胞凋亡的情况以及分化成神经元的效率,通过RT-qPCR检测标志性基因的表达量,综合评估添加的小分子化合物组合对脑类器官形成的影响.结果在脑类器官神经祖细胞发育的…查看全部>>