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耐热α-淀粉酶的筛选、基因克隆和酶学性质分析CSTPCD
作者：廖思明孙靓王青艳申乃坤朱婧黄桂媛黄纪民陈东黄日波
发表期刊：广西科学 2017年1期
关键词：Anoxybacillus sp.GXS-3菌株重组淀粉酶AmyGX克隆与表达酶学性质
摘要：[目的]筛选耐热α-淀粉酶并实现异源表达,同时分析其酶学性质特征.[方法]以M9培养基加上可溶性淀粉作为选择性分离培养基,从腾冲火山温泉土壤中筛选到产淀粉酶的菌株Anoxybacillus sp.GXS-3.根据淀粉酶氨基酸保守序列,设计引物进行PCR扩增,然后对目标序列进行步移扩增,获得淀粉酶基因AmyGX.将AmyGX与表达载体pQE30连接,导入大肠杆菌M15中表达,对重组酶进行分离纯化和酶学性质分析.[结果]AmyGX 基因长…查看全部>>
大肠杆菌O157VT2 B亚基基因的克隆与表达北大核心CSCD
作者：郑峰周志江刘建青
发表期刊：中国人兽共患病杂志 2005年2期
关键词：大肠杆菌O157志贺毒素2B亚基克隆与表达
摘要：目的对大肠杆菌O157VT2 毒素 B亚基基因进行克隆、表达与鉴定,为VT2 毒素的抗原、抗体大规模制备及疾病的预防、诊断和疫苗研究打下基础.方法设计寡核苷酸引物,利用PCR技术从出血性大肠杆菌O157的染色体基因组中扩增出VT2毒素B亚基基因,连接到表达载体pET-28a以构建重组质粒.将重组质粒转入表达宿主菌BL21感受态细胞,通过IPTG诱导进行表达,对表达蛋白进行SDS-PAGE电泳分析和Western检测. 结果用PCR方法…查看全部>>
罗非鱼无乳链球菌 EsxA 基因克隆与原核表达北大核心CSTPCD
作者：马艳平梁志凌马江耀刘振兴郝乐柯浩
发表期刊：动物医学进展 2016年4期
关键词：Ⅶ型分泌系统无乳链球菌EsxA 基因克隆与表达
摘要：Ⅶ型分泌系统（T7SS）是近年来发现的分泌系统，分泌两种胞外蛋白，EsxA 基因编码的 ESAT6蛋白和 EsxB 基因编码的 CFP-10蛋白。分泌蛋白具有良好的免疫原性，促进细菌从巨噬细胞吞噬体逃逸、影响巨噬细胞凋亡及裂解细胞等生物学功能，与致病性密切相关。以罗非鱼源无乳链球菌为模板，克隆到294 bp 的 EsxA 基因，将目的序列克隆到 pMD18-T 载体，经测序，目的序列与无乳链球菌 EsxA 基因同源率在99％以上…查看全部>>
犬瘟热病毒Yunnan株H基因的克隆与表达北大核心
作者：聂福平李作生邱薇张富强张连江宋贵强龙贵伟廖金任玉莹余方芳张泉鹏王灵强范泉水
发表期刊：动物医学进展 2008年1期
关键词：犬瘟热病毒H基因克隆与表达免疫印迹
摘要：根据已发表的犬瘟热病毒(CDV)Onderstepoort株的序列设计两对引物,以犬瘟热病毒云南株感染的Vero细胞收获病毒提取的总RNA为模板,RT-PCR扩增出H基因的939 bp(H基因前段,H1)和920 bp(H基因后段,H2)片段,分别将其定向克隆于PET-28a(+)中,将重组质粒转化宿主菌BL21(DE3)plysS,在35℃、1.0 mmol/L IPTG诱导下获得良好表达,经SDS-PAGE鉴定,表达的融合蛋白为3…查看全部>>
HCMV gp52基因的克隆与表达北大核心CSCDCSTPCD
作者：方毅司炳银张雨祝庆余
发表期刊：军事医学科学院院刊 2003年5期
关键词：人巨细胞病毒克隆与表达gp52蛋白聚合酶链反应基因表达酶联免疫吸附测定
摘要：目的:克隆表达人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)gp52基因,制备特异性抗原,用于HCMV早期诊断.方法:从感染的HCMV细胞上清液中提取病毒的DNA, 用PCR扩增gp52蛋白IgM抗原决定簇编码区DNA片段,并将其克隆到pGEM-Teasy载体测序,然后将其克隆到含有谷胱甘肽转移酶(GST)融合蛋白表达载体pGEX-5X-3中表达,表达产物经GST亲和层析柱纯化后,采用ELISA和免疫印迹(Wes…查看全部>>
酿酒酵母乙醛脱氢酶的克隆与表达CSCDCSTPCD
作者：黄瑞王璐沈微张晓梅许赣荣
发表期刊：工业微生物 2009年1期
关键词：乙醛脱氢酶酿酒酵母克隆与表达
摘要：利用PCR技术从酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae W303-1A)总DNA中扩增得到1 .9k b乙醛脱氢酶编码基因 aldh ,将其连接到表达载体pEtac,得到重组载体pEtac- aldh, 重组载体在大肠杆菌JM109中得到高效表达.对含有 aldh 的基因工程菌进行表达研究表明:该菌株在37℃下,以1.0mmol/L IPTG诱导5h酶活力达到22.8U,比酶活力为15. 0U/mg蛋白,而对照菌株…查看全部>>
巨型艾美耳球虫配子体GAM56基因的克隆与表达北大核心
作者：张晓燕丁隽刘群
发表期刊：中国兽医杂志 2007年11期
关键词：巨型艾美耳球虫配子体克隆与表达基因保护性抗体鸡球虫免疫原性抗原免疫
摘要：目前报道的鸡球虫有7个种，其中巨型艾美耳球虫具有较强的致病性，而且是鸡体内致病性球虫中免疫原性最强的球虫，只需要几个卵囊就可以产生较好的保护能力.后来的研究也发现用纯化的巨型艾美耳球虫配子体抗原免疫的鸡可产生明显的保护性抗体，
Collimonas sp.ZL261蛋白酶基因的克隆、表达及其酶学特性北大核心CSCDCSTPCD
作者：李洁琼张殿朋卢彩鸽吴慧玲于莉刘伟成
发表期刊：核农学报 2014年8期
关键词：山冈单胞菌蛋白酶基因克隆与表达
摘要：分离自西藏色季拉山海拔4530 m高山草甸土壤的山冈单胞菌(Collimonas sp.)ZL261代谢产物具有很高的蛋白酶活性,为了明确其蛋白酶种类及其作用特点,本文采用限制性内切酶法构建了菌株ZL261的基因组文库,利用透明圈法筛选其胞外蛋白酶活性克隆,对其基因及蛋白结构进行了分析,进一步研究了该酶的表达和酶学特性.结果表明:该蛋白酶基因(命名为capro)包含一个长为1092 bp的完整开放阅读框(GenBank:KF99284…查看全部>>
脱氢奎尼酸合成酶基因aroB在大肠杆菌中的克隆表达及酶活力测定北大核心CSCD
作者：杨毅刚周长林窦洁陈新
发表期刊：中国药科大学学报 2005年4期
关键词：脱氢奎尼酸合成酶生物合成克隆与表达奎尼酸
摘要：目的:在大肠杆菌中高效表达脱氢奎尼酸合成酶.方法:以大肠杆菌基因组为模板,采用PCR扩增得到脱氢奎尼酸合成酶基因aroB,并在大肠杆菌中进行表达.结果:在浓度为0.5 mmol/L的IPTG诱导4 h后aroB基因表达量占菌体总可溶性蛋白40.0%,SDS-PAGE显示重组菌诱导后表达的脱氢奎尼酸合成酶蛋白分子量约为38 kDa,发酵液中脱氢奎尼酸合成酶的酶活力达到178 U/L,为宿主菌的35.6倍.结论:脱…查看全部>>
BMP-2表达载体的构建及其转录活性测定CSTPCD
作者：邓少林权毅潘显明屈波
发表期刊：四川医学 2006年12期
关键词：骨形成蛋白克隆与表达转录活性
摘要：目的构建BMP-2表达载体及测定其转录活性.方法将骨形成蛋白(bone morphology protein-2,BMP-2)基因克隆入带HA标签的BMP-2表达载体中,得到带HA标签的重组质粒pGBKT7/HA-BMP-2,转染pGBKT7/HA-BMP-2重组质粒入酵母AH109、Y187细胞.结果 Western印迹检测表明表达了与预期分子量大小一致的BMP-2.结论 BMP-2表达载体的成功构建为我们深入研究BMP-2在促…查看全部>>

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