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24 Articles

植物病毒沉默抑制子P25的原核表达及纯化北大核心CSCD
Authors：秦波麻鹏达伏秀青杨涛刘晶莹董春光王兴智
《吉林农业大学学报》 Issue 4,2005
Keywords：基因沉默抑制子P25蛋白原核表达系统
Abstract：通过体外DNA重组技术将P25基因连接在pET28a(+)载体上,构建成重组质粒.经PCR扩增、酶切鉴定及DNA序列分析,融合的P25基因序列正确.将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行异丙基β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,经过亲和层析得到纯品目的蛋白P25.
病毒样颗粒疫苗的研究进展北大核心CSCDCSTPCD
Authors：司菡曲新勇陆家海
《中国人兽共患病学报》 Issue 1,2008
Keywords：病毒样颗粒疫苗衣壳蛋白原核表达系统真核表达系统免疫细胞病毒感染免疫保护
Abstract：病毒样颗粒（Virus-Like Particles，VLPs）是含有某种病毒的一个或多个结构蛋白的空心颗粒，没有病毒的核酸（DNA／RNA），不能自主复制，其在形态上与真正病毒粒子相同或相似，可通过和病毒感染一样的途径呈递给免疫细胞，有效地诱导机体的免疫系统产生免疫保护反应。病毒的衣壳蛋白一般具有天然的自我装配能力。近年来发现多数病毒的衣壳蛋白基因在真核表达系统以及少数病毒的衣壳蛋白基因在原核表达系统中都能够有效地实现自我组装，这为…More>>
胸腺肽α1的温度诱导原核可溶性表达与简易纯化北大核心CSCDCSTPCD
Authors：陈培富李红芳鲁琼芬陈俊
《云南农业大学学报》 Issue 2,2012
Keywords：胸腺肽α1原核表达系统镍亲和层析反相高效液相色谱玫瑰花环试验
Abstract：将人工合成的人胸腺肽α1(Tα1)基因插入到载体pBV222,转化大肠杆菌DH5α菌株并置42℃诱导表达可溶性融合蛋白.融合蛋白经镍亲和层析柱纯化,加入肠激酶切割,再将酶切反应体系回到镍亲和层析柱.所获穿过液中的重组胸腺肽α1(rTα1),经十二烷基硫酸钠-聚苯烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和反相高效液相色谱(RP-HPLC)分离及分析,纯度分别为94.5％和72％.以癌症患者外周血淋巴细胞开展玫瑰花环试验,所获rTα1纯品显示出…More>>
人细胞角蛋白1基因的克隆、原核表达及纯化CSTPCD
Authors：王博侯卫坤周艳蔡永松王林玉张英韩燕孟列素
《山西医科大学学报》 Issue 2,2017
Keywords：细胞角蛋白1基因克隆融合蛋白原核表达系统
Abstract：目的克隆人细胞角蛋白1(cytokeratin 1,CK1),原核表达系统表达融合蛋白并进行纯化和鉴定.方法从人角质形成细胞系中提取RNA,以RT-PCR反转录cDNA,用特异性引物PCR扩增人CK1编码区全长基因(NM_006121.3),内切酶EcoR Ⅰ和HindⅢ双酶切PCR产物和pET-28a载体,T4 DNA连接酶将人CK1编码区全长基因克隆到pET-28a载体上,IPTG诱导融合蛋白his-CK1的表达.融合蛋白经N…More>>
犬干扰素α2的原核表达及抗病毒活性分析北大核心CSTPCD
Authors：姚凌云芮荣王永山王晶宇欧阳伟钱晶吴世妍夏兴霞诸玉梅王晓丽潘群兴
《中国动物传染病学报》 Issue 2,2018
Keywords：重组犬干扰素α2原核表达系统抗病毒活性
Abstract：本研究将人工合成的犬干扰素α2成熟区序列插入原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28a-CaIFN-α2;然后将该质粒转化至大肠杆菌Rosetta感受态中进行IPTG诱导表达,经SDS-PAGE和Western blot分析鉴定,分子量约为23 kDa的目的蛋白表达,表达的重组蛋白主要以包涵体的形式存在,表达量约占菌体总蛋白的52.5%.包涵体蛋白经变性、复性和纯化处理后,获得的重组CaIFN-α2纯度为92%…More>>
重组人细胞角蛋白9cDNA的原核表达及纯化北大核心CSCDCSTPCD
Authors：王博周艳侯卫坤蔡永松张英王林玉韩燕孟列素
《西安交通大学学报（医学版）》 Issue 4,2017
Keywords：原核表达系统细胞角蛋白9融合蛋白细胞骨架
Abstract：目的克隆人细胞角蛋白CK9的cDNA,通过原核表达系统表达融合蛋白并进行纯化和鉴定.方法从人角质形成细胞系(HaCaT)中提取RNA,以RT-PCR反转录cDNA,使用特异性引物PCR扩增出人CK9编码区全长并克隆到pET-28a载体上,再用IPTG诱导融合蛋白his-CK9的表达.表达的融合蛋白通过Ni2+亲和层析纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot鉴定.结果测序鉴定构建表达载体中CK9的cDNA序列正确;融…More>>
重组角质细胞生长因子(KGF)的原核表达及优化
Authors：田顺立郑春阳
《安徽农业科学》 2018年33期《安徽农业科学》 Issue 33,2018
Keywords：角质细胞生长因子(KGF)原核表达系统密码子优化融合表达标签蛋白
Abstract：[目的]在原核表达系统中进行重组人角质细胞生长因子(KGF)的表达及优化.[方法]选取缺失N端23个氨基酸残基的KGF片段作为目的基因,按照大肠杆菌的密码子偏好性,将其进行密码子优化.使用BL21(DE3)菌株表达KGF(ΔN23)、SUMO融合的SUMO-KGF(ΔN23)和Fh8-SUMO融合的Fh8-SUMO-KGF(ΔN23),并测试不同表达温度(37、23℃)对KGF(ΔN23)表达结果的影响.[结果]在BL21(DE3)菌…More>>
M2e与Qβ融合原核表达载体的构建与初步评价
Authors：荆新蕊邢体坤宋路萍杨振苹王亚萍刘伟宋彦君张静静
《中国当代医药》 2021年15期《中国当代医药》 Issue 15,2021
Keywords：M2e蛋白类病毒颗粒Qβ颗粒蛋白原核表达系统流式细胞术免疫组化
Abstract：目的构建流感病毒M2基因(M2e)与Qβ的重组原核表达载体,并对Qβ-M2e病毒颗粒子(VLPs)进行免疫学评价,为预防性疫苗的研制打下基础.方法通过分子生物学手段,将M2e同Qβ质粒载体连接构建重组原核表达载体,经酶切、测序鉴定后,将重组质粒转化大肠杆菌BL21中,密度梯度离心回收并纯化其表达产物Qβ-M2e.动物免疫后通过免疫组化、流式细胞术检测生发中心(GC)B细胞的增殖情况.结果酶切、测序结果均与预期结果相符,电镜下观察…More>>
人VIGILIN基因分段克隆及表达北大核心CSCDCSTPCD
Authors：俞小琴魏玲刘秋英黄元赵荣策覃扬
《四川大学学报（医学版）》 Issue 5,2015
Keywords：VIGILIN基因结构域分段克隆原核表达系统
Abstract：目的探讨入高密度脂蛋白结合蛋白(HDLBP)-VIGILIN蛋白与其他蛋白质相互作用的机制.方法根据VIGILIN基因全长编码区的结构域,将VIGILIN基因全长编码区分为N端、KH1-7、KH8-12、KH13-14、C端5段,以pDsred2-N1/VIGILIN为模板分别扩增5个片段及全长cDNA后克隆至pGEX 5X 3原核表达载体,测序,然后将鉴定后的重组质粒转化到表达宿主菌E.coli BL21中进行诱导表达GST-V…More>>
重组牛乳铁蛋白素在大肠杆菌中的表达北大核心CSCDCSTPCD
Authors：邢芳芳印遇龙黄瑞林孔祥峰李铁军唐志如张友明
《食品科学》 2008年4期《食品科学》 Issue 4,2008
Keywords：牛乳铁蛋白素摹因原核表达系统Tricine-SDS-PAGE抑菌活性
Abstract：将牛乳铁蛋素(lactoferricin B)基因克隆到表达载体pET28a后,转化到BL21大肠杆菌表达系统,筛选表达温度和诱导剂IPTG的浓度,使其在原核表达系统中表达,将诱导表达的产物进行Tricine-SDS-PAGE蛋白电泳及抑茵活性检测,证明该表达产物是乳铁蛋白素.实验结果表明,Lactofcrricin B基因能够在原核表达系统中表达,表达量约占细菌总蛋白的21%,而且表达的蛋白质具有生物学活性.

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