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- TaqMan 实时荧光定量RT-PCR检测变异剪接体CSTPCD摘要：目的:建立应用TaqMan实时荧光定量RT-PCR技术对基因mRNA的各个变异剪接体分别进行定量检测的技术.方法:以对ERCCI的变异剪接体进行检测为例.使用TRIzol裂解新鲜手术切除的卵巢癌组织后提取总RNA,逆转录为eDNA后,PCR扩增ERCCI基因以及beta-actin基因,琼脂糖电泳分离PCR产物,纯化后连接到pMD18-T载体,转化人感受态大肠杆菌,提取并纯化质粒,稀释成不同浓度作为标准品以便制作标准曲线.结果:成功构…查看全部>>
- 大鼠死后脑组织GAPDH mRNA多位点降解与晚期死亡时间的关系研究北大核心CSCDCSTPCD摘要：3与其的比值同PMI之间有相关性(R2=0 898,0 871,0 879),而GAPDH mRNA 4和GAPDH mRNA 5与其的比值同PMI之间无相关性.结论 同一组织中看家基因GAPDH的不同位点存在降解速率的差异性.选取降解速率慢的靠近3′端的位点作为引物,可能更适于研究晚期死亡时间的推断.
- 基因Ⅶ型新城疫病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立
- H7亚型禽流感病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立北大核心CSCD
- HPV16 E6小干扰RNA与宫颈癌细胞中E6 p53 p21关系的研究北大核心CSCDCSTPCD摘要：目的 探讨HPV16 E6小干扰RNA(siRNA)与宫颈癌CaSki细胞中E6、p53、p21之间的关系.方法 2004年9月至2005年3月于四川大学华西第二医院,应用化学合成针对HPV16 E6的siRNA借脂质体转染CaSki细胞,实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和流式细胞术检测E6 siRNA转染前后细胞中HPV16E6、p53、p21 mRNA及其蛋白表达的变化.结果 转染24 h,E6 mRNA的表达显著…查看全部>>
- 甜菜夜蛾HSP90基因克隆及高温胁迫下其表达量的变化北大核心CSCDCSTPCD摘要：为阐明热激蛋白90(heat shock protein 90,HSP90)在甜菜夜蛾Spodoptera exigua(Hübner)幼虫抵抗高温过程中的作用,克隆了其HSP90基因cDNA全长序列,并检测了在系列高温胁迫下不同龄期幼虫体内其相对表达量.根据已报道的热激蛋白90基因序列同源性设计简并引物,利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)结合cDNA末端快速扩增(RACE)技术成功克隆了甜菜夜蛾HSP90基因全长cDNA(Ge…查看全部>>
- 检测LUNX mRNA表达诊断非小细胞肺癌微转移的可行性及其临床意义CSTPCD摘要：背景与目的 微转移的检测对非小细胞肺癌的个体化治疗和指示预后具有重要意义.LUNX为近年新发现的人类肺组织特异性基因.本研究的目的是检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者LUNX mRNA的表达情况,探讨其作为微转移检测分子标志物的可行性.方法 选择初治的NSCLC患者62例,以肺部良性疾病10例与健康人10例作为对照组,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)和普通RT-PCR技术,检测肺癌、良性病变肺组织、骨髓和外周血…查看全部>>
- PD-L1基因实时荧光定量RT-PCR法的建立及在大鼠肝移植中的应用北大核心CSCDCSTPCD摘要：目的 建立real-time RT-qPCR(实时荧光定量RT-PCR)检测大鼠PD-L1的方法,应用该方法检测大鼠移植肝中PD-L1 mRNA的水平.方法 两袖套法复制大鼠肝移植耐受组(BN→BN)及排斥组( LEW→BN)模型,术后7d处死受体,检测肝功能ALT和AST水平,HE染色病理分析排斥程度,Trizol法提取移植肝总RNA并反转录为cDNA;选β-actin作为内参,复制SYBR Green I real-time RT…查看全部>>
- PrPc重组蛋白脑内接种金黄地鼠对mRNA表达的影响北大核心CSCD摘要：为明确将牛PrPc重组蛋白接种金黄地鼠脑内是否引起异常临床表现、脑组织病理学变化及对其mRNA表达产生影响,为进一步研究PrPc蛋白与异构体PrPsc 的结构转换机制提供基础数据,将纯化的牛PrPc重组蛋白磷酸盐缓冲液制剂进行地鼠颅内接种,约3 μL/只,对照接种磷酸盐缓冲液(PBS);102 d后取出脑组织:一部分福尔马林固定后进行常规H.E.染色观察, 另一部分提取脑组织总RNA,进行实时荧光定量RT-PCR检测.结果表明:处理未…查看全部>>
- SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR测定猴免疫缺陷病毒RNA拷贝数方法的建立CSCDCSTPCD摘要：目的 建立SYBR Green Ⅰ荧光染料实时定量RT-PCR方法,测定猴免疫缺陷病毒(SIV)RNA拷贝数.方法 巢式RT-PCR扩增SIV病毒RNA gag基因上1360-1837之间的长度为477 bp的片段,将该片段克隆到pGEM T载体上,构建pGEM-SIVgag477质粒.该质粒经限制性内切酶Not I酶切后,进行体外转录,转录出的RNA产物(RS)纯化后10倍系列稀释,作出标准曲线,作为SIV病毒RNA荧光定量检测的外…查看全部>>