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Apak稳定敲除细胞系的建立及其p53活性和凋亡水平的变化北大核心CSCDCSTPCD
作者：梅兴沙王建郑惠珍田春艳
发表期刊：军事医学 2016年4期
关键词：慢病毒属ApakCRISPR/Cas9敲除基因,p53质粒凋亡克隆形成
摘要：目的：利用CRISPR／Cas9慢病毒系统在人结肠癌细胞（ HCT116细胞）中建立稳定及永久性Apak敲除细胞系，检测Apak敲除后细胞部分生物学活性、p53活性和凋亡水平的变化。方法构建lentiCRISPR v2－sgRNA Apak敲除质粒，进行慢病毒包装，感染HCT116细胞，嘌罗霉素筛选出阳性克隆。通过蛋白质免疫印迹检测Apak蛋白水平，筛选得到Apak稳定敲除细胞系。分别通过报告基因实验、流式细胞术和克隆形成实验测定Ap…查看全部>>
慢病毒载体靶向介导p66shc基因沉默北大核心CSTPCD
作者：张婵董文斌赵帅李清平康兰雷小平郭琳翟雪松
发表期刊：重庆医学 2015年1期
关键词：慢病毒属RNA干扰p66shc
摘要：目的：构建p66shc基因重组慢病毒表达载体，并将之转染至293T细胞，通过RNA干扰致使p66shc基因沉默，为进一步研究p66shc基因功能奠定基础。方法筛选3个RNA靶点，命名为p66shc‐shc1、p66shc‐shc2、p66shc‐shc3，与双酶切后的pLenR‐绿色荧光蛋白（GPH）（含有GFP表达）连接，转化入感受态的DH5α细胞，挑取阳性克隆测序正确后，与pRsv‐REV、pM‐Dlg‐pRRE、pMD2G一起转…查看全部>>
慢病毒介导SOX9基因转染骨髓间充质细胞中的基因表达CSTPCD
作者：白洁玉梁大川程鹏杨自权卫小春
发表期刊：中国骨伤 2013年7期
关键词：骨关节炎细胞介导免疫慢病毒属SOX9基因骨髓间充质细胞
摘要：目的:构建携带小鼠SOX9基因的慢病毒载体,体外转染小鼠骨髓间充质细胞,观察小鼠SOX9基因在小鼠间充质细胞中的表达.方法:从含有小鼠SOX9基因的质粒提取总RNA,利用RT-PCR方法扩增目的基因.连接目的基因与经Age-Ⅰ酶切线性化的慢病毒载体,转化感受态的大肠杆菌对质粒进行扩增,筛出阳性转化子,经293T细胞包装,收集病毒后,通过基因测序和限制性核酸内切酶酶切的方法对质粒进行鉴定.Lenti-SOX9-EGFP体外转染小鼠骨髓间…查看全部>>
线粒体细胞色素C氧化酶RNAi慢病毒载体的构建北大核心CSCD
作者：陈艳邵建永吴秋良江高峰夏云飞陈忠平
发表期刊：中国病理生理杂志 2005年6期
关键词：基因线粒体重组慢病毒属载体细胞色素C氧化酶
摘要：目的:通过构建携带细胞色素C氧化酶基因的RNAi慢病毒载体,获得可供转染的滴度,为下一步研究该基因缺陷在真核细胞中的影响提供物质基础. 方法: 根据线粒体细胞色素C氧化酶设计的两条互补的单链寡核苷酸退火后形成双链,插入到pENTR/U6质粒缺口末端,连接在质粒上生成含RNAi盒的pENTR/U6载体;通过重组作用将pENTR/U6载体的RNAi盒重组到pLenti6/BLOCK-iT-Dest 载体上,构建含U6启动子、靶序列和Pol…查看全部>>
慢病毒介导shRNA沉默AP2β对肝癌细胞生物特性的影响北大核心CSTPCD
作者：马路园霍楠朱祥丛瑞初众唐枝韩聚强徐小洁赵彩彦
发表期刊：军事医学 2019年9期
关键词：癌,肝细胞AP2β短发夹RNA慢病毒属质粒转染HEK293细胞
摘要：目的通过构建慢病毒介导的靶向AP2β基因短发夹RNA(shRNA)重组质粒,观察AP2β低表达对肝细胞癌(HCC)细胞生物学功能的影响.方法构建人AP2β慢病毒shRNA质粒,将重组质粒转染至人胚肾293T细胞.AP2βshRNA与4个包装质粒共同转染293T细胞包装成慢病毒后感染HepG2细胞,经嘌呤霉素筛选2周后,收集细胞,通过实时定量PCR(qRT-PCR)及Western印迹检测AP2βshRNA干扰效果;利用CCK-8法…查看全部>>
大鼠CGRP基因重组慢病毒载体的构建及滴度测定北大核心CSCDCSTPCD
作者：陈攀科石蓓许官学刘志江王冬梅
发表期刊：重庆医学 2013年34期
关键词：降钙素基因相关肽慢病毒属DNA ,重组
摘要：目的：构建含大鼠降钙素相关基因肽（CGRP）基因的慢病毒表达载体，为后续转染目的细胞并研究 CGRP 的功能奠定基础。方法通过基因工程技术将 CGRP 基因克隆到穿梭质粒中，构建 Puc57-CGRP 质粒，用双酶切法构建慢病毒表达载体（pLenO-DCE-CGRP），将该质粒载体与4种辅助包装质粒共转染293T 细胞，转染的293T 细胞继续培养48 h 后，收集其上清液，浓缩得到高滴度的慢病毒液，然后采用倍比稀释法和流式细胞术检测…查看全部>>
PTEN基因重组慢病毒的构建北大核心CSTPCD
作者：陈玲娜蒋磊谷杭芝郑飞云
发表期刊：实用医学杂志 2010年23期
关键词：慢病毒属PTENIshikawa细胞
摘要：目的:构建PTEN基因重组慢病毒,转染真核细胞Ishikawa并检测PTEN基因在真核细胞内的表达.方法:分子克隆重组人PTEN基因与含有CMV启动子和绿色荧光蛋白(GFP)的慢病毒载体PLIG,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定.将重组子PLIG-PTEN和包装质粒共转染包装细胞293T细胞,包装产生慢病毒,感染子宫内膜癌细胞株Ishikawa,观察慢病毒表达载体所携带的GFP基因在细胞内的表达,使用RT-PCR和western-blot…查看全部>>
小鼠肝细胞SMAC基因特异干扰载体的构建及慢病毒包装CSTPCD
作者：吴凡易在凤田德英
发表期刊：临床肝胆病杂志 2014年5期
关键词：RNA干扰SMAC慢病毒属
摘要：目的：构建并鉴定小鼠SMAC特异干扰载体，并进行慢病毒包装。方法针对小鼠SMAC基因设计并合成3对干扰序列siRNA1、siRNA2、siRNA3及一对阴性对照序列siRNAn，脂质体法转染小鼠肝细胞，Real time PCR法筛选出最佳干扰序列。依据该最佳干扰序列合成DNA oligo，连接GV115载体，获得重组干扰质粒，PCR鉴定阳性克隆并测序鉴定构建的正确性。将该重组干扰质粒与辅助质粒pHelper1．0和pHelper2．…查看全部>>
两种重编程系统诱导人牙源性多潜能干细胞的对比研究
作者：谭小兵徐静舒孙贵虎宋俊呈戴青原
发表期刊：重庆医学 2017年1期
关键词：多潜能干细胞乳头干细胞慢病毒属人诱导性多潜能干细胞根尖乳头干细胞重编程仙台病毒
摘要：目的：对比研究两种人牙源性多潜能干细胞重编程体系的特点。方法分别利用 STEMCCA 慢病毒／饲养层和仙台病毒／基质胶两种重编程系统，将人根尖乳头干细胞重编程为 iPS 细胞，比较两种方法的诱导效率、诱导工作量、iPS 细胞非整倍体核型比例、外源性基因消除难易程度等情况。结果 STEMCCA 重编程体系需要制备饲养层细胞 MEF，重编程效率约为0．1％，后期经 Cre-Loxp 酶切技术可得到无外源性转录基因的 iPS 细胞。仙台病毒…查看全部>>
慢病毒介导的酸性成纤维细胞生长因子基因在乳腺癌细胞MCF-7中的表达及其意义北大核心CSCDCSTPCD
作者：王伟施恒亮付春玲曹让娟朱筱娟
发表期刊：吉林大学学报（医学版） 2012年1期
关键词：酸性成纤维细胞生长因子慢病毒属乳腺肿瘤伤口愈合
摘要：目的:探讨慢病毒系统介导的实现酸性成纤维细胞生长因子(FGF 1)在MCF-7细胞中的过表达,获得初步稳定并且大量表达FGF-1的细胞株,为研究FGF-1在肿瘤发生及发展中的作用奠定基础.方法:构建FGF-1的慢病毒表达载体pWPXLd-FGF-1,通过与包装质粒psPAX2、pMD2.G共转染293FT细胞进行病毒包装,用包装成功后病毒液侵染乳腺癌MCF-7细胞,通过流式细胞仪检测侵染效率,通过Western blotting检测G…查看全部>>

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