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共找到 44 条结果
- 重组Mash1慢病毒表达载体的构建摘要：目的:克隆小鼠Mash1基因的全长cDNA,构建其慢病毒表达载体Lentivirus-Mash1, 为进一步研究Mash1在神经发育及干细胞神经分化中的作用奠定基础. 方法: 应用RT-PCR从小鼠13 d胚胎中扩增出Mash1 cDNA片段,经回收纯化与pGEM-T载体连接并转化感受态细菌JM109,通过蓝白筛选、PCR扩增和双酶切鉴定出阳性菌落,并对其进行基因测序.BamHⅠ和XholⅠ双酶切pGEM-T-Mash1和Lentiv…查看全部>>
- 共沉默miR-221-3p/222-3p表达抑制骨髓间充质干细胞增殖及促成软骨分化北大核心CSTPCD摘要：背景：基于干细胞的组织工程技术作为治疗骨关节损伤修复的有效手段，具有广泛的应用前景。研究表明miRNA在调控干细胞向软骨分化过程中具有重要的作用。
目的：探讨共感染慢病毒介导的反义miR-221-3p/222-3p(microRNA-221-3p，microRNA-222-3p)对人骨髓间充质干细胞成软骨分化的作用，为临床软骨损伤修复提供新的策略。
方法：利用miRNA基因芯片技术筛选转化生长因子β3诱导人骨髓间充…查看全部>> - 携带人尾型同源盒基因-2基因慢病毒表达载体的构建及鉴定摘要：目的 构建尾型同源盒基因-2(CDX2)基因的慢病毒表达载体并进行鉴定.方法 PCR扩增CDX2基因片段后,将其克隆入慢病毒表达载体pWPI,通过PCR、酶切和测序鉴定重组质粒.重组质粒转染包装细胞293T后获得包装的病毒颗粒.病毒颗粒感染直肠癌细胞XB 1847,经PCR和Western Blot证明重组慢病毒携带的CDX2在XB1847细胞内表达的情况.结果 经PCR扩增、酶切及测序验证,重组质粒构建成功,命名为pWPI-C…查看全部>>
- 利用慢病毒表达载体干扰梅花鹿角柄骨膜细胞P21基因北大核心CSCDCSTPCD摘要：利用慢病毒干扰系统，对东北梅花鹿角柄骨膜干细胞（PP细胞）P21基因进行干扰。结果表明：筛选出的2条针对梅花鹿P21基因的siRNA与载体质粒PLVTHM连接成功，并与pMD2．G、pCMV-dr8.9质粒共转染到293t细胞，获得重组慢病毒；通过感染PP细胞并利用流式细胞仪进行分选，获得了纯度90％以上的感染细胞；荧光定量RT-PCR检测表明P21基因的mRNA水平大幅度下调，干扰效率达到70％。表明成功干扰了P21基因在PP细胞中…查看全部>>
- RNAi沉默STAT3对结直肠癌SW480细胞的抑制作用及其机制北大核心CSCDCSTPCD摘要：目的:慢病毒介导siRNA沉默结直肠癌SW480细胞内信号转导和转录活化因子3(signal transducer and activators of transcription 3,STAT3)的表达,观察其对SW480细胞凋亡、侵袭、集落形成及下游信号分子Mcl-1、caspase3表达的影响.方法:用携带针对STAT3的siRNA的慢病毒Lenti-STAT3-siRNA感染SW480细胞,Real-time PCR和We…查看全部>>
- miR-30a表达载体构建、病毒包装和表达活性的检测CSCDCSTPCD摘要：目的 构建携带miR-30a的慢病毒表达载体,为研究miR-30a在慢性粒细胞白血病中的作用机制及对伊马替尼耐药性的影响奠定基础.方法 提取人骨髓细胞基因组DNA,扩增miR-30a的前体序列,克隆到plVTHM慢病毒表达载体上,测序鉴定.重组载体进行病毒包装,感染K562细胞,测定病毒滴度.感染的K562细胞用流式细胞仪分选带有绿色荧光的GFP阳性的细胞,对分选的细胞用实时荧光定量PCR法检测miR-30a在细胞内的表达水平.最后用…查看全部>>
- 水牛YY1基因克隆及其shRNA片段的筛选北大核心CSCDCSTPCD摘要：本试验旨在克隆水牛阴阳因子1(YY1)基因,并筛选获得可有效抑制水牛YY1基因表达的shRNA干扰片段.以水牛成纤维细胞cDNA为模板,采用RT-PCR方法,扩增水牛YY1基因CDS序列,将其连接插入到pMD18-T载体中,进行序列测序并分析.采用Xho Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切,将水牛YY1基因编码区定向克隆至pEG-FP-N1载体中,构建其真核表达载体pYY1-EGFP-N1.设计2条靶向水牛YY1基因的shRNA序列并构建其慢病毒…查看全部>>
- t-PA基因慢病毒表达载体的构建及其在内皮祖细胞中的表达研究摘要：目的:构建t-PA基因慢病毒表达载体并转染脐血来源的内皮祖细胞,评估其转染后功能变化情况.方法:RT-PCR获得t-PA cDNA,将真核表达质粒pcDNA3.1(+)和t-PA基因片段分别双酶切,构建pcDNA3.1(+)/t-PA质粒.对其进行酶切鉴定和测序,使目的基因连接入载体质粒中,构建成重组慢病毒载体质粒,制备包装病毒质粒转染内皮祖细胞.倒置荧光显微镜下观察转染24h后内皮祖细胞中绿色荧光蛋白的表达情况,RT-qPCR和We…查看全部>>
- 小鼠Islet-1基因慢病毒表达载体的构建及其诱导C3H10T1/2细胞向心肌样细胞特异性分化北大核心CSCDCSTPCD摘要：目的 研究Islet-1对干细胞分化的影响.方法 用PCR钓取目的 基因,将目的 基因与pLenO-WPI载体连接,选取阳性质粒,与辅助质粒共同感染293T细胞生产出慢病毒载体.感染C3H10T1/2细胞,实时荧光定量PCR及Western blot检测Islet-1和心肌、肝脏、骨骼及神经各系统相关标志物的表达,免疫荧光检测心肌肌钙蛋白T(cTnT)表达部位.结果 PCR及测序显示目的 片段正确插入,实验组有Islet-1表达;心肌…查看全部>>
- 增强表达PTEN蛋白对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖的作用北大核心CSCDCSTPCD