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潮霉素抗性3T3细胞的建立和鉴定CSTPCD
作者：张梅英李华董婉维杨葳王禄增王太一
发表期刊：中国实验动物学报 2004年3期
关键词：3T3 细胞潮霉素饲养层ES细胞
摘要：目的建立具有潮霉素(hygromycin)抗性的3T3细胞系,用于转染目的基因(pTRE-Ins-human)的ES阳性细胞克隆筛选的饲养层.方法通过脂质体转染的方法,将含有潮霉素B磷酸转移酶基因的质粒pHyg导入3T3细胞中,利用潮霉素的药物选择特性,对转染细胞进行压力筛选,并对其进行PCR鉴定.结果经500 μg/ml的潮霉素压力筛选后,获得了抗性细胞克隆.抗性3T3细胞的形态和生长速度与正常3T3细胞没有差异,特异性核苷酸引物检…查看全部>>
21世纪的生殖医学CSTPCD
作者：陈子江李媛
发表期刊：现代妇产科进展 2002年1期
关键词：生殖医学ART遗传学诊断分子生物学技术ES细胞
摘要：上世纪中末期崛起的生殖医学作为一门新兴边缘学科,在过去的20多年里发展迅速,日益受到瞩目.不仅在临床患者的诊断、治疗方面不断有许多新技术、新发现,在生殖基础理论研究及应用方面也有了更多新的认识,为生殖理论增添了新内容,更为其临床应用提供了依据.21世纪的到来,现代生命科学的进步以及人类对自身生存质量更高的期盼,将为新世纪生殖医学事业的腾飞开创更美好的前景.
小鼠LRP16基因同源重组ES细胞克隆的鉴定北大核心CSTPCD
作者：韩为东伍志强赵亚力司艺玲母义明孟元光Masatoshi Nomura
发表期刊：军医进修学院学报 2006年6期
关键词：LRP16基因打靶ES细胞
摘要：目的:为深入研究LRP16基因的生理功能,本研究将小鼠LRP16基因特异打靶载体pB△16转染小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell),并筛选同源重组克隆.方法:通过电转染方法将LRP16插入失活型打靶载体导入ES细胞,经G418筛选,挑取抗性克隆,Southern blot方法鉴定同源重组ES细胞克隆.结果:打靶载体成功转染ES细胞,Southern blot筛选100个抗性克隆,结果显示有一个打靶序列同源重组型插入…查看全部>>
小鼠LRP16基因打靶载体的构建和胚胎干细胞同源重组克隆鉴定CSCDCSTPCD
作者：伍志强韩为东赵亚力司艺玲母义明孟元光Masatoshi Nomura
发表期刊：中国实验动物学报 2006年3期
关键词：LRP16基因打靶ES细胞
摘要：目的既往研究表明LRP16基因是一个雌激素反应基因,其表达水平与乳腺癌细胞增殖及侵袭密切相关.为对该基因进行生理功能研究,本文构建了针对小鼠LRP16基因的打靶载体,转染胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES cells)并筛选同源重组克隆.方法 PCR方法筛选129品系小鼠基因组文库中LRP16克隆,在第5外显子内插入SA-RIES-βgeo序列,构建插入失活型打靶载体并转染ES细胞,经G418筛选,挑取抗性克隆…查看全部>>
制备嵌合体小鼠实验中ES细胞的处理方法CSTPCD
作者：王惟于洋张梅英王禄增郑志红
发表期刊：实验动物与比较医学 2008年6期
关键词：嵌合体小鼠ES细胞
摘要：目的介绍两种制备嵌合体小鼠实验中ES细胞的处理方法.方法一种为差速贴壁分离法即消化后的ES细胞接种在明胶包被的平皿中,利用饲养层细胞与ES细胞贴壁速度的不同来分离ES细胞;另一种方法为冰水浴自然沉淀分离法,即消化后的ES细胞移入15ml离心管中冰水浴,利用细胞间自然沉淀的位置不同分离ES细胞.结果两种方法均可得到足够数量处于未分化状态的ES细胞.结论这两种方法都可以应用于制备嵌合体小鼠实验中的ES细胞处理.
小鼠胚胎干细胞体外定向诱导分化成骨细胞CSCDCSTPCD
作者：宋晓平窦忠英雷安民华进联冯秀亮屈雷
发表期刊：农业生物技术学报 2006年1期
关键词：ES细胞成骨细胞诱导分化骨组织工程
摘要：将小鼠5 d龄ES-D3细胞源的类胚体(EBs)单细胞,按5×104/mL接种6孔细胞培养板,在DMEM基础培养基中使EBs单细胞贴壁培养.于第14～21天时,分别添加60%成骨细胞条件培养液(A组)、50μg/mL维生素C+50 mmol/L β-磷酸甘油(B组)和50μg/mL维生素C+50mmol/L β-磷酸甘油+1 μmol/L地塞米松(C组),并设不添加诱导剂对照组(D组).第22天时用1%茜素红染色显示阳性细胞,计算成骨…查看全部>>
动物基因打靶技术的原理与应用
作者：杨秀芹刘娣韩玉刚
发表期刊：国外畜牧科技 2001年5期
关键词：基因打靶基因敲除同源重组ES细胞
摘要：基因打靶是利用同源重组的原理,定点修饰目的基因组上特定位点的基因,定向地改变生物遗传特性的方法,作为新兴的遗传工具,它有着广泛的应用前景.
用基因捕获法制作鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制子基因"敲出"小鼠
作者：刘湘汤华唐任宽荒喜美山村研一
发表期刊：医学分子生物学杂志 2005年1期
关键词：捕获载体鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制子ES细胞
摘要：目的分析鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制子基因在小鼠生长发育过程中的功能.方法用特殊的捕获载体导入小鼠ES细胞中,5′RACE方法鉴定成功地捕获鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制子基因(Oazin)后,由这种ES制作了Oazin"敲出"小鼠.结果 Oazin"敲出"小鼠捕获载体位于Oazin基因启动子上游,Qazin基因的转录被抑制.结论 Oazin"敲出"小鼠为分析Oazin基因的功能提供了有用的实验材料.
MSCs构建的类真皮对ES细胞源性表皮干细胞分化潜势的影响北大核心CSCDCSTPCD
作者：刘爱军黄锦桃李海标
发表期刊：基础医学与临床 2007年7期
关键词：ES细胞表皮干细胞皮肤附属结构定向分化
摘要：目的探讨以MSCs构建类真皮对ES细胞源性表皮干细胞分化潜能的影响.方法大鼠骨髓MSCs与复合凝胶一明胶海绵组成类真皮,Hoechst33342标记E14-ES细胞,经羊膜诱导4 d后,形成表皮干细胞克隆,将二者构成皮肤类似物,埋植于129小鼠皮下.术后2、4、6和8周取材,做HE染色,β1整合素、CK15、CK19、CEA、CK18免疫荧光双标和免疫组化观察.结果术后2和4周,植块中以形成单层立方或柱状上皮构成的管状和泡状结构…查看全部>>
兔ES样细胞系的建立及其特性分析北大核心CSCD
作者：童英刘爱民尚克刚
发表期刊：北京大学学报（自然科学版） 1997年4期
关键词：家兔ES细胞细胞分化核移植建系条件
摘要：报道从２３７枚家兔胚胎中建成７个可连续传代的ＥＳ样细胞系。建系条件为，使用小鼠原始胚胎成纤维细胞（ＭＥ）作饲养层，以含１０％胎年血清和１０％兔血清的ＤＭＥＭ／Ｆ１２为培养基，添加白血病抑制因子（ＬＩＦ）或上皮生长因子（ＥＧＦ），胚龄为９０，９６ｈ。该细胞系的细胞。在许多方面类似于小鼠ＥＳ细胞，具干细胞的形态特征，呈集落型生长，可连续传代并保持其形态特征，具有一定的自发分化和诱导分化的能力，悬浮培养

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