跨越式滚环等温扩增技术结合CRISPR/Cas12a定量检测海产品中的副溶血性弧菌OA北大核心CSCDCSTPCD
将CRISPR/Cas12a系统与跨越式滚环等温扩增技术(saltatory rolling circle amplification,SRCA)相结合,建立一种快速、灵敏定量检测海产品中副溶血性弧菌(Vibrio parahemolyticus)的方法(SRCA-Cas12a)。通过SRCA扩增靶标DNA,CRISPR/Cas12a系统识别靶标DNA并裂解单链报告探针,从而建立SRCA-Cas12a检测方法。分析该方法的特异性与灵敏度,并进行加标回收实验和实际样品检测。结果显示该方法可区分副溶血性弧菌和其他食源性致病菌,特异性良好。在最优检测体系下,建立了副溶血性弧菌菌液浓度的对数与荧光信号强度的线性关系,线性方程为y=1.8472x+2.4738(R^(2)=0.9866),检出限为3.6 CFU/mL(R_(SN)=3)。在人工污染样品中副溶血性弧菌的加标回收率为95.5%~104.4%。在实际样品检测中,该方法的敏感性为100.0%、特异性为95.2%、符合率为97.2%。本研究所建立的SRCA-Cas12a方法具有特异性好、检测限低的优点,为副溶血性弧菌的快速定量检测提供了一种新策略。
董换哲;苑宁;张蕴哲;杨倩;卢鑫;郭威;张伟
河北农业大学食品科技学院,河北保定071001河北农业大学理工学院,河北沧州061100河北农业大学食品科技学院,河北保定071001河北农业大学食品科技学院,河北保定071001 河北大学公共卫生学院,河北保定071002河北农业大学理工学院,河北沧州061100河北农业大学食品科技学院,河北保定071001河北农业大学食品科技学院,河北保定071001 河北农业大学生命科学学院,河北保定071001 河北省人畜共患病原微生物分析与防控重点实验室,河北保定071001
轻工纺织
CRISPR/Cas12a跨越式滚环等温扩增副溶血性弧菌定量检测海产品
《食品科学》 2022 (14)
P.289-295,7
国家自然科学基金面上项目(32172288,31371772)河北省自然科学基金重点项目(C2019204342)河北省重点研究开发计划项目(18275501D)中央引导地方科技发展资金项目-基础研究项目(216Z5501G)河北省外专百人计划项目(360-0803-JSN-3YGS)河北省高等学校科学技术研究项目(QN2022073)河北省博士后科研项目(B2021005007)河北农业大学食品加工学科群经费资助项目(2021-06)。
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