红豆肽的制备、分离纯化及降糖活性研究OACSTPCD

目的:筛选红豆蛋白的酶解工艺并研究红豆多肽的降糖活性及构效关系。方法:采用碱沉酸提法提取红豆粗蛋白,以肽得率、水解度、α-葡萄糖苷酶抑制、Fe^(2+)螯合率、DPPH清除率为指标筛选最佳蛋白酶;酶解得到红豆多肽,醇沉多糖后通过DA201-C大孔吸附树脂进行脱盐纯化后,测定多肽的分子量及氨基酸组成来探讨其构效关系。结果:经4种蛋白酶(中性、碱性、风味、复合蛋白酶)水解后,碱性蛋白酶的肽得率为82.95%,水解度为52.67%,实验浓度范围内最佳α-葡萄糖苷酶抑制为72.14%,比其他3种酶均高;85%乙醇醇沉后的肽糖比、α-葡萄糖苷酶抑制率(73.49%)和α-淀粉酶抑制率(31.31%)均最高,脱盐纯化后肽含量高达97.61%,在2 mg/mL时测定对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶抑制效果,分别为52.49%和14.63%,表明除去多糖后红豆多肽仍具有独立降血糖活性;经测定,红豆多肽以小分子为主,3 kDa以下占比91.40%,其中小于1000 Da占比达到75.28%。纯化后疏水性氨基酸占比约37.28%,其中甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸和谷氨酸含量较高。结论:碱性蛋白酶是制备红豆多肽的最佳蛋白酶,分离纯化后的红豆多肽具有降糖活性,其活性可能与4种疏水性氨基酸含量较高且分子量较小有关。