绵羊源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及生物学特性研究OACSTPCD

[目的]分离、鉴定绵羊源多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm),研究分离菌株的生物学特性。[方法]对内蒙古自治区呼和浩特市托克托县某家庭养殖户出现典型呼吸道疾病症状的绵羊进行现场解剖,观察呼吸系统主要器官和脾脏的病理学变化,制备肺组织病理切片;无菌采集肺组织进行细菌分离培养,对分离菌株进行表型鉴定、分子生物学鉴定和荚膜血清型鉴定;采用PCR法检测毒力基因携带情况;利用纸片扩散法开展分离菌株对11种抗菌药物的敏感性试验;采用腹腔注射法评价分离菌株对小鼠的致病性。[结果]发病羊只肺脏与胸膜、心包膜粘连,肺组织中存在坏死灶,肺门淋巴结肿大,脾脏有出血点。经分离和纯化培养,获得1株细菌,命名为2021-TX-06株,该菌株在含5%马血清的TSA培养基上呈白色、圆形、微凸起的小菌落,为革兰阴性小杆菌,能发酵利用甘露醇、山梨醇、海藻糖、木糖、葡萄糖,符合Pm的生化反应特性;经16S rDNA序列PCR扩增及序列比对,确定2021-TX-06株为Pm;经荚膜血清分型鉴定,该菌株为荚膜血清D型,携带ptfA、fimA、Fur等15种毒力基因,对四环素、头孢曲松、庆大霉素、多黏菌素B等药物敏感,对诺氟沙星、恩诺沙星、氯霉素耐药;以5×10^(8)CFU/mL浓度的菌液腹腔注射试验组小鼠,72 h后死亡率为100%,从死亡小鼠肺脏中回收到与攻毒菌株一致的菌株。[结论]从出现典型呼吸道疾病症状的绵羊肺组织中分离到1株荚膜血清D型Pm流行株,该菌株携带多种毒力基因,对部分抗菌药物表现出一定耐药性,对小鼠具有较强致病力。