柔肝止泻方对腹泻型肠易激综合征肝气乘脾证大鼠模型的干预效应及机制研究OACSTPCD

目的:从肠黏膜通透性及肠道炎症角度探讨柔肝止泻方对肝气乘脾型腹泻型肠易激综合征的干预效应及机制。方法:50只SPF级Wistar雌性大鼠中随机选取8只作为空白组,其余制备肝气乘脾型腹泻型肠易激综合征(IBS-D)病证结合大鼠模型。造模后将40只成模大鼠随机分为模型组、匹维溴铵组及柔肝止泻方低、中、高剂量组,每组8只,分别给予生理盐水、匹维溴铵及不同剂量的柔肝止泻方(0.86、1.72、3.44 g·kg-1),灌胃14 d后取材。记录体质量、粪便含水量,并行相关行为学实验;光镜下观察HE染色后结肠组织形态,并于透射电镜下观察肠黏膜超微结构变化;采用ELISA法检测大鼠血浆中D-乳酸和血清中TNF-α、IL-6、IFN-γ的含量;采用Western blot法及RT-qPCR法检测大鼠结肠组织中MMP9、p38MAPK、MLCK、occludin蛋白以及mRNA的表达水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠体质量下降、粪便含水量增加及新奇抑制摄食潜伏期延长(P<0.01);与模型组比较,柔肝止泻方各剂量组大鼠体质量增加、粪便含水量减少及新奇抑制摄食潜伏期缩短(P<0.05,P<0.01)。HE染色显示,各组大鼠结肠组织结构完整,未见明显的病理性改变。透射电镜可见,模型组肠上皮细胞间隙显著增宽,紧密连接及缝隙连接结构模糊,桥粒显著减少,绒毛稀疏、不齐,柔肝止泻方各剂量组肠上皮细胞间隙明显缩小,顶端连接复合体结构清晰,绒毛整密。与空白组比较,模型组大鼠D-乳酸及炎症因子含量增加(P<0.05,P<0.01),结肠组织中MMP9、p38MAPK、MLCK的蛋白及mRNA表达水平均升高(P<0.05,P<0.01),occludin的表达水平下降(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,柔肝止泻方各剂量组D-乳酸及炎症因子含量降低(P<0.05,P<0.01),结肠组织中MMP9、p38MAPK、MLCK的蛋白及mRNA表达水平均下调(P<0.05,P<0.01),occludin水平上调(P<0.01)。结论:柔肝止泻方可改善肝气乘脾型IBS-D大鼠模型肠黏膜通透性及肠道炎症,可能是通过减少炎症因子,抑制MMP9激活p38MAPK/MLCK信号通路发挥干预效应。