肝宁方对肝细胞癌的影响及作用机制初探OA北大核心CSTPCD

目的:研究肝宁方对肝细胞癌的作用并初步探讨其作用机制。方法:细胞实验:将40只SD大鼠予肝宁方灌胃7 d后提取含药血清。采用CCK8检测肝宁方含药血清浓度分别为5%、10%、20%、30%时对人肝癌细胞HepG2活力的影响。将HepG2细胞分为空白组和肝宁方组含药血清组,使用5%肝宁方含药血清干预24 h后提取蛋白进行质谱前处理,再进行DIA定量蛋白质组学分析,包括建立图谱数据库和DIA数据采集及分析,最后采用蛋白免疫印迹(WB)技术验证TAGLN蛋白表达水平。动物实验:10只BALB/c裸小鼠分为模型组和肝宁方组,予皮下注射人肝癌细胞MHCC-97H构建肝癌异种植瘤模型,造模成功后给予0.9%生理盐水或肝宁方灌胃,连续给药14 d。造模开始到给药结束,每隔1周测量皮下肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线,给药结束后剥离肿瘤,采用苏木精-伊红(HE)染色法检测肿瘤组织病理学情况。结果:细胞实验:肝宁方含药血清呈剂量依赖性降低HepG2细胞活力(P<0.05,P<0.01),选用5%肝宁方含药血清进行后续实验。DIA定量蛋白质组学分析结果发现36个上调蛋白,23个下调蛋白(P<0.05),GO富集分析显示细胞组分、细胞功能及生物学过程等。KEGG富集分析表明差异蛋白与补体和凝血级联反应、PPAR信号通路等关系密切。Reactome富集分析显示了包括血小板α颗粒含量的胞吐作用在内的20条信号通路。PPI网络分析发现TGFB1、SERPINE1、TAGLN等38种蛋白位于网络节点。WB结果发现肝宁方含药血清组TAGLN蛋白表达比空白组明显上调(P<0.01)。动物实验:通过肝癌裸鼠皮下肿瘤模型发现肝宁方能够抑制肿瘤生长(P<0.05),HE染色结果提示肝宁方可促进肿瘤坏死。结论:肝宁方能抑制HepG2细胞增殖及HCC肿瘤增长,促进肿瘤组织坏死,其作用机制涉及多个生物进程和信号通路,其中可能与调控TAGLN蛋白表达有关。